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Sobre a aula
Este video descreve brevemente a ação de enzimas e a atividade que será desenvolvida no laboratório, a determinação da atividade enzimática da alfa-glicosidase presente no lisado de levedura.
Disciplina
QBQ1453-3 Bioquímica Experimental
EMENTA
Preparação de lisado celular. Fundamentos da detecção, dosagem, separação e identificação de aminoácidos, proteínas, carboidratos e lipídeos que empregam colorimetria, espectroscopia, cromatografia, eletroforese, diálise e ensaios de atividade enzimática. Princípios e elaboração de
curvas-padrão. Determinação de concentração de atividade enzimática e de atividade específica. Determinação de parâmetros cinéticos de reações enzimáticas. Cálculos de recuperação e enriquecimento de atividade na purificação de enzimas. Determinação de estrutura primária de peptídeos e proteínas (enzimas).
OBSERVAÇÃO: Para cursar a disciplina de forma satisfatória é necessário que o aluno tenha conhecimento básico sobre Estrutura e Propriedades de Biomoléculas e Metabolismo.
Objetivo
Ampliar o conhecimento em Bioquímica. Transmitir aos alunos os fundamentos teóricos de técnicas amplamente utilizadas na Bioquímica que exploram as propriedades físicas, químicas e funcionais dos carboidratos, lipídeos, aminoácidos e proteínas. Apresentar e trabalhar problemas experimentais relacionados a elas. Desenvolver a capacidade de planejar experimentos, selecionar técnicas e procedimentos para realizá-los, tratar e analisar criticamente os resultados obtidos.
Índice de vídeos da disciplina
- QBQ1453 - Cinética Enzimática
- QBQ1453 - Cinética Enzimática
- QBQ1453 - Aula prática de cinética da alfa-glicosidase
- QBQ1453 - Eletroforese e espectrometria de massas
- QBQ1453 - Determinação do rendimento e recuperação da alfa-glicosidase
- QBQ1453 - Aula prática de purificação da alfa-glicosidase por precipitação com sulfato de amônio
- QBQ1453 - Prática de atividade enzimática
- Identificação de lipídeos de levedura
- Aula 1 - Estratégias de Lise Celular
- QBQ1453 - Aula teórica sobre precipitação com sulfato de amônio
- QBQ1453 - Atividade enzimática
- Prática 3_Identificação de alguns lipídeos de levedura
- Aula Prática 1 - Lise de Céluas de Levedura (Saccharomyces cerevisiae)
- Proteínas: dosagem
- Aula 2 - Quantificação de açúcares redutores
- Dosagem de proteínas pelo método de Bradford
- Aula Prática 2 - Quantificação de açúcares redutores no lisado de S. cerevisiae
As enzimas são substâncias de natureza protéica, consideradas catalisadores biológicos, facilitando a ocorrência das reações, diminuindo a energia de ativação dos reagentes, também denominados de substratos enzimáticos, sendo essa energia o potencial inicial para desencadear uma reação.
Normalmente os mecanismos orgânicos são lentos e pouco espontâneos, dependendo de enzimas específicas para promover e regular o dinâmico funcionamento metabólico. Portanto, consideradas unidades funcionais da catálise celular.
Essas biomoléculas podem ser classificas segundo vários critérios. Contudo, o principal evidencia a afinidade e ação ao substrato:
- Hidrolases → enzimas que associadas a moléculas de água, promovem a cisão (quebra) de ligações covalentes.
Exemplo: Peptidases
- Ligases → enzimas que formam novas moléculas, unindo duas pré-existentes.
Exemplo: Sintetases
- Oxidoredutases → enzimas que efetuam transferências de elétrons
(oxi-redução).
Exemplo: Desidrogenases
- Transferases → enzimas que realizam translocação de grupos funcionais como grupamento amina, fosfato, carbonila e carboxila, de uma molécula para outra.
Exemplo: Quinase
- Liases → enzimas que atuam na remoção de moléculas de água, gás carbônico e amônia, a partir da ruptura de ligações covalentes.
Exemplo: Descarboxilase
- Isomerases → enzimas que mediam a conversão de substâncias isoméricas, sejam isômeros
geométricos ou ópticos.
Exemplo: Epimerases
Esses compostos possuem duas características importantes: a primeira relacionada à complementaridade enzima substrato (teoria da chave-fechadura); e a segunda relativa à restituição enzimática no final da reação, permanecendo intacta para reiniciar subseqüentes reações similares.
Entre os fatores que influenciam a atividade enzimática causando sua disfunção, conseqüente desnaturação (inativação), está: a elevação e diminuição da temperatura ou pH, superior ou compreendendo um patamar de ação otimizada conforme atuação local de cada enzima (exemplo: pepsina produzida no estômago, degradando proteínas em pH ácido), bem como a concentração de enzimas ou substratos que podem aumentar ou diminuir a velocidade da reação, de acordo com a quantidade de enzimas e a ocupação de seus sítios de ativação.